Купить (625 RUB)
сгенерировать QR код
Открытый доступ
Доступ платный или только для Подписчиков
Термостабильная эстераза estUT1 бактерии Ureibacillus thermosphaericus: влияние дополнительного процессируемого домена TrxA на свойства фермента
https://doi.org/10.18412/1816-0387-2019-5-399-407
Аннотация
Ген термостабильной эстеразы бактерии Ureibacillus thermosphaericus был экспрессирован в штамме E. coli BL21(DE3) в составе генетической конструкции pET32b-estUT1, содержащей домен TrxA, под контролем Т7-промотора. Удельная активность и относительная термостабильность полученного таким образом рекомбинантного фермента увеличилась от 45,2 до 65,8 % (инкубация 1 ч при 70 °С). Обнаружено, что дополнительный домен TrxA не оказывает заметного влияния на рН оптимум активности фермента и его субстратную специфичность. В то же время отсутствие домена TrxA обусловливает значительное увеличение стабильности estUT1 в присутствии различных химических веществ, включая этанол и метанол. Максимальная каталитическая эффективность (kcat /KM) для эстеразы зарегестрирована в отсутствие домена TrxA и составила 280,0 с–1·мМ–1. Таким образом, введение дополнительного процессируемого домена TrxA, с одной стороны, позволяет секретировать фермент в растворенном виде, но, с другой, снижает термостабильность целевого белка.
Об авторах
К. Н. Сорокина
Институт катализа им. Г.К. Борескова СО РАН, Новосибирск
Россия
Россия
Ю. В. Самойлова
Институт катализа им. Г.К. Борескова СО РАН, Новосибирск
Россия
Россия
В. Н. Пармон
Институт катализа им. Г.К. Борескова СО РАН, Новосибирск
Россия
Россия
Список литературы
1. López-López O., Cerdán M.E., González Siso M.I. // Current Protein & Peptide Science. 2014. V. 15. № 5. P. 445-455.
2. Piligaev A.V., Sorokina K.N., Samoylova Y.V., Parmon V.N. // Energy Conversion and Management. 2018. V. 156. P. 1-9.
3. Robic A., Ullmann C., Auffray P., Persillon C., Martin J. // OCL. 2017. V. 24. № 4. P. D404.
4. Самойлова Ю.В., Пилигаев А.В., Сорокина К.Н., Розанов А.С., Пельтек С.Е., Новиков А.А., Альмяшева Н.Р., Пармон В.Н. // Катализ в промышленности. 2015. Т. 15. № 6. С. 90—96.
5. Samoylova Y.V., Sorokina K.N., Romanenko M.V., Parmon V.N. // Extremophiles. 2018. V. 22. № 2. P. 271-285.
6. Jaeger K.-E., Eggert T. // Current Opinion in Biotechnology.2002. V. 13. № 4. P. 390-397.
7. Haki G.D., Rakshit S.K. // Bioresource Technology. 2003. V. 89. № 1. P. 17-34.
8. Sriyapai P., Kawai F., Siripoke S., Chansiri K., Sriyapai T. // International Journal of Molecular Sciences. 2015. V. 16. № 6. P. 13579-13594.
9. Kademi A., Aїt-Abdelkader N., Fakhreddine L., Baratti J.C. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2000. V. 10. № 4. P. 395-401.
10. Li H., Zhang X. // Protein Expression and Purification. 2005. V. 42. № 1. P. 153-159.
11. Kulkarni N., Gadre R.V. // Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. 2002. V. 28. P. 344-348.
12. Liu L., Yang H., Shin H. D., Chen R. R., Li J., Du G., Chen J. // Bioengineered. 2013. V. 4. № 4. P. 212-223.
13. Samoylova Y.V., Sorokina K.N., Piligaev A.V., Parmon V.N. // Catalysts. 2018. V. 8. № 4 P. 154.
14. Saïda F., Uzan M., Odaert B., Bontems F. // Current Protein & Peptide Science. 2006. V. 7. № 1.
15. Lee S., Kim S.M., Lee R.T. // Antioxidants & redox signaling. 2013. V. 18. № 10. P. 1165-1207.
16. Su E., Xu J., Wu X. // Biotechnology and Applied Biochemistry. 2015. V. 62. № 1. P. 79-86.
17. Laemmli U.K. // Nature. 1970. V. 227. P. 680.
18. Bradford M.M. // Analytical Biochemistry. 1976. V. 72. № 1. P. 248-254.
19. Eom G.T., Song J.K., Ahn J.H., Seo Y.S., Rhee J.S. // Applied and Environmental Microbiology. 2005. V. 71. № 7. P. 3468.
20. Costa S., Almeida A., Castro A., Domingues L. // Frontiers in microbiology. 2014. V. 5. P. 63-63.
21. Bird L.E. // Methods. 2011. V. 55. № 1. P. 29-37.
22. Young C.L., Britton Z.T., Robinson A.S. // Biotechnology Journal. 2012. V. 7. № 5. P. 620-634.
23. Paraskevopoulou V., Falcone F.H. // Microorganisms. 2018. V. 6. № 2. P. 47.
24. Alquéres S.M.C., Branco R.V., Freire D.M.G., Alves T.L.M., Martins O.B., Almeida R.V. // Enzyme Research. 2011. V. 2011. P. 7.
Рецензия
Для цитирования:
Сорокина К.Н., Самойлова Ю.В., Пармон В.Н. Термостабильная эстераза estUT1 бактерии Ureibacillus thermosphaericus: влияние дополнительного процессируемого домена TrxA на свойства фермента. Катализ в промышленности. 2019;19(5):399-407. https://doi.org/10.18412/1816-0387-2019-5-399-407
For citation:
Sorokina K.N., Samoilova Yu.V., Parmon V.N. Thermostable esterase estUT1 of bacteria Ureibacillus thermosphaericus: the influence of additional processed domain TrxA on enzyme properties. Kataliz v promyshlennosti. 2019;19(5):399-407. (In Russ.) https://doi.org/10.18412/1816-0387-2019-5-399-407
Просмотров:
680
Послать статью по эл. почте 